Cyp4f15 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-430669-LAC

Cyp4f15 codifica una monoossigenasi del citocromo P450 murina della famiglia CYP4F che catalizza l’ω-idrossilazione degli acidi grassi e dei mediatori lipidici. Regolando il turnover degli eicosanoidi e di lipidi di segnalazione correlati, gli enzimi CYP4F influenzano la segnalazione infiammatoria, il metabolismo ossidativo e le vie dell’omeostasi lipidica. Un’attività alterata dei CYP4F può modificare le concentrazioni locali di lipidi bioattivi, collegando questo asse enzimatico a studi sulla regolazione immunitaria, sul metabolismo epatico e intestinale e sulle risposte allo stress tissutale. Cyp4f15 rappresenta quindi un nodo utile per analizzare le reti dei mediatori lipidici e i programmi metabolici responsivi agli xenobiotici in modelli murini.

Le particelle di attivazione lentivirale Cyp4f15 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Cyp4f15 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Cyp4f15 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Cyp4f15, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Cyp4f15. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Cyp4f15 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.