Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
CTP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417472
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CTP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CTP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CTP Anticuerpo (C-12): sc-518244
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CTP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-417472 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
SLC25A1 codifica la proteína transportadora mitocondrial de citrato (CTP), un transportador de la membrana interna que intercambia citrato/isocitrato por malato y conecta el metabolismo mitocondrial con los programas biosintéticos citosólicos. Al exportar citrato para la producción de acetil‑CoA dependiente de la ATP‑citrato liasa, CTP favorece la síntesis de lípidos de novo, la acetilación de proteínas y la regulación epigenética, además de influir en el equilibrio redox mediante vías posteriores generadoras de NADPH. La actividad de SLC25A1 se integra con el metabolismo central del carbono, incluido el ciclo del TCA, la glucólisis y el flujo anaplerótico, modulando las respuestas celulares a la disponibilidad de nutrientes y al estrés mitocondrial. La desregulación del transporte de citrato se ha asociado con el remodelado metabólico alterado observado en el cáncer, los trastornos del neurodesarrollo y contextos de señalización inflamatoria, lo que convierte a SLC25A1 en un nodo útil para estudios mecanísticos del crosstalk mitocondria–citosol.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CTP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC25A1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC25A1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC25A1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CTP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC25A1 para la investigación de la señalización de CTP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de SLC25A1 críticos para la función de CTP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC25A1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CTP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CTP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC25A1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CTP (h) y el plásmido HDR CTP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC25A1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC25A1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.