CTNNBL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409293-ACT

CTNNBL1 (catenina beta-like 1) codifica uma proteína nuclear com repetições do tipo armadillo que se associa a componentes do spliceossoma e tem sido implicada na regulação do processamento de pré-mRNA e de redes de proteínas de ligação a RNA. Estudos funcionais relacionam a CTNNBL1 à coordenação de programas de expressão gênica que afetam a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e a manutenção da organização nuclear. Alterações na expressão de CTNNBL1 foram observadas em conjuntos de dados transcriptômicos de câncer e em estudos genéticos de fenótipos relacionados ao sistema imune, sustentando sua relevância para o acoplamento desregulado entre transcrição e splicing. Assim, a CTNNBL1 é de interesse para dissecar como complexos proteicos nucleares modulam a maturação de RNA e vias de sinalização a jusante em células humanas.

CTNNBL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CTNNBL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CTNNBL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CTNNBL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CTNNBL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CTNNBL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CTNNBL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CTNNBL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CTNNBL1 em células tumorais com expressão de CTNNBL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.