CTAGE5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406164

Descripción general

CTAGE5 (también conocido como MIA2) codifica un componente asociado a la membrana de la maquinaria de exportación del retículo endoplásmico (RE) que favorece el tráfico dependiente de COPII y la organización de los sitios de salida del RE. Al coordinar la carga de proteínas y la formación de vesículas, CTAGE5 contribuye a una secreción eficiente y al mantenimiento de la proteostasis del RE, procesos estrechamente vinculados a la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) y a la señalización del estrés del RE. La alteración de la función de CTAGE5 puede modificar el flujo de la vía secretora, afectar el manejo intracelular de proteínas y reconfigurar las respuestas celulares al estrés metabólico o inflamatorio. En biología humana, estas rutas se investigan con frecuencia en contextos en los que la capacidad secretora y la homeostasis del RE influyen en fenotipos relevantes para la enfermedad, incluida la adaptación de células tumorales y la señalización relacionada con el sistema inmunitario.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CTAGE5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MIA2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MIA2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MIA2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CTAGE5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MIA2 para la investigación de la señalización de CTAGE5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MIA2 críticos para la función de CTAGE5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MIA2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CTAGE5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CTAGE5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MIA2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CTAGE5 (h) y el plásmido HDR CTAGE5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MIA2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MIA2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.