CPSF1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405273-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CPSF1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CPSF1 Double Nickase Plasmid (h) e il CPSF1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CPSF1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CPSF1 Antibody (G-10): sc-166281
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CPSF1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405273-NIC | 20 µg | $410.00 |
CPSF1 (fattore di specificità della scissione e della poliadenilazione, subunità 1) è un componente fondamentale del macchinario di processamento dell’estremità 3′ del pre-mRNA, che coordina il riconoscimento dei segnali di poliadenilazione, la scissione endonucleolitica e l’aggiunta della coda poli(A). Attraverso il suo ruolo nel complesso CPSF, CPSF1 collega la terminazione della trascrizione con la maturazione dell’RNA, influenzando la stabilità del trascritto, l’esportazione nucleare e l’efficienza di traduzione. L’alterazione della scissione e poliadenilazione dipendenti da CPSF1 può modificare l’utilizzo di siti alternativi di poliadenilazione e rimodellare ampiamente i programmi di espressione genica legati al controllo del ciclo cellulare, alla differenziazione e alle risposte allo stress. Una regolazione anomala del processamento dell’estremità 3′ dell’mRNA è stata associata a fenotipi proliferativi e neurosviluppo, rendendo CPSF1 un nodo utile per studiare, nelle cellule umane, i meccanismi patologici guidati dal processamento dell’RNA.
CPSF1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CPSF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CPSF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CPSF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CPSF1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.