Plasmide CRISPR/Cas9 KO CPS2 (h): sc-403519

Présentation

CAD code pour un complexe enzymatique cytosolique multifonctionnel qui catalyse les premières étapes engagées de la biosynthèse de novo des pyrimidines, la CPS2 (carbamoyl‑phosphate synthétase 2) initiant la conversion de la glutamine et du bicarbonate en vue de la production d’UMP. Cette activité soutient l’homéostasie des pools de nucléotides, indispensable à la réplication de l’ADN, à la transcription de l’ARN et à la synthèse des phospholipides membranaires, reliant ainsi la fonction de CAD à la progression du cycle cellulaire et à l’adaptation métabolique. CAD est régulé par des voies de signalisation nutritionnelles et de croissance, notamment par un contrôle allostérique par le PRPP et une inhibition par rétrocontrôle par l’UTP, et il est modulé par phosphorylation en aval des voies MAPK/mTOR. Un métabolisme des pyrimidines dérégulé et une activité de CAD altérée ont été associés à des phénotypes prolifératifs et à une reprogrammation métabolique observés dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier les réponses au stress nucléotidique et le maintien du génome.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CPS2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CAD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CAD, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CAD à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CPS2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CAD pour l'étude de la signalisation de CPS2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CAD essentiels à la fonction de CPS2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CAD pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CPS2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CPS2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CAD. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CPS2 plasmide HDR (h) et le CPS2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CAD pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CAD définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.