CPE Plasmide Double Nickase (h): sc-404429-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CPE Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CPE Double Nickase Plasmid (h) e il CPE Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CPE. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CPE Antibody (H-6): sc-393760
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CPE Plasmide Double Nickase (h) | sc-404429-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CPE Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404429-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La carbossipeptidasi E (CPE) è un’esopeptidasi della via secretoria che rimuove i residui basici C-terminali dagli intermedi di proormoni e proneuropeptidi, favorendo la maturazione di peptidi bioattivi nelle cellule endocrine e neuroendocrine. Oltre al suo ruolo catalitico, la CPE partecipa al traffico dei granuli secretori a nucleo denso e alla secrezione regolata, collegando l’elaborazione dei peptidi allo smistamento vescicolare e al rilascio accoppiato allo stimolo. Alterazioni dell’espressione o della funzione della CPE sono state associate a perturbazioni dell’omeostasi metabolica e neuroendocrina e sono state studiate in contesti quali fenotipi legati all’obesità, suscettibilità al diabete e disfunzioni neurologiche. Queste caratteristiche rendono la CPE un nodo utile per analizzare la biosintesi degli ormoni peptidici, la biologia dei granuli secretori e le reti di segnalazione dipendenti da neuropeptidi processati.
CPE Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CPE nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CPE. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CPE. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CPE interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.