Particules Lentivirales d'Activation (h) Cox-2: sc-400072-LAC

PTGS2 code la cyclooxygénase-2 (COX-2), une enzyme inductible et limitante qui convertit l’acide arachidonique en prostaglandine H2, contrôlant ainsi la biosynthèse en aval des prostaglandines et des thromboxanes. L’expression de COX-2 est rapidement augmentée par des cytokines inflammatoires, des facteurs de croissance et des signaux microbiens via des voies incluant NF-κB, MAPK et JAK/STAT, reliant des programmes transcriptionnels dépendants du stimulus à la production de médiateurs lipidiques. En modulant la signalisation portée par les prostaglandines, COX-2 influence le tonus vasculaire, les interactions plaquettes–endothélium, les réponses de douleur et de fièvre, ainsi que le remodelage tissulaire. Une activité dérégulée de PTGS2/COX-2 est largement utilisée comme lecture moléculaire dans des modèles d’inflammation chronique, d’inflammation associée aux tumeurs, de neuroinflammation et de physiopathologie cardiovasculaire.

Les particules d'activation lentivirales Cox-2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PTGS2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Cox-2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PTGS2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Cox-2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PTGS2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.