Plasmide CRISPR d'Activation (h) COL1A2: sc-400598-ACT

COL1A2 code la chaîne pro‑α2(I) du collagène de type I, un collagène fibrillaire majeur qui s’assemble en hétérotrimères et confère une résistance à la traction aux tissus conjonctifs, notamment le derme, les tendons, l’os et le stroma vasculaire. Son expression est étroitement régulée au cours du dépôt et du remodelage de la matrice extracellulaire (MEC), en s’intégrant aux voies de signalisation TGF‑β/SMAD, à l’adhésion médiée par les intégrines et aux voies de fibrillogenèse du collagène, qui façonnent l’architecture tissulaire et la mécanotransduction. Une transcription dérégulée de COL1A2 ou des variants pathogènes perturbent l’assemblage du collagène et l’homéostasie de la matrice, contribuant à des maladies héréditaires du tissu conjonctif et à des phénotypes de remodelage fibrotique. En recherche biomédicale, COL1A2 sert de marqueur et d’effecteur clé de l’activation des fibroblastes, du renouvellement de la MEC et des contributions du stroma à l’inflammation et aux microenvironnements tumoraux.

COL1A2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COL1A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

COL1A2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COL1A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COL1A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de COL1A2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COL1A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de COL1A2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie COL1A2 dans les cellules tumorales présentant une expression de COL1A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.