CMAS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409575

Übersicht

CMAS kodiert die Cytidinmonophosphat‑N‑Acetylneuraminsäure‑Synthetase, ein nukleäres Enzym, das die Umwandlung von Neu5Ac zu CMP‑Neu5Ac katalysiert, dem aktivierten Donorsubstrat, das für Sialylierungsreaktionen im Golgi-Apparat erforderlich ist. Durch die Kontrolle der Verfügbarkeit von CMP‑Sialinsäure beeinflusst CMAS die Sialylierung von Glykoproteinen und Glykolipiden und wirkt sich damit auf Zell‑Zell‑Interaktionen, Rezeptorsignalgebung, Immunerkennung und die Proteinstabilität an der Plasmamembran aus. Die CMAS‑Aktivität verknüpft den zentralen Kohlenhydratstoffwechsel mit der Biosynthese von Glycokonjugaten innerhalb des Sialinsäure‑Stoffwechselwegs und breiterer Glykosylierungsnetzwerke. Veränderte Sialylierungsmuster, die mit einer dysregulierten CMAS‑Funktion einhergehen, sind relevant für Studien zu angeborenen Glykosylierungsstörungen, neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und dem Remodeling der Zelloberfläche von Krebszellen.

Das CMAS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CMAS-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CMAS-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CMAS nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CMAS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CMAS-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CMAS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CMAS-Exone abzielen, die für die CMAS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CMAS-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CMAS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CMAS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CMAS-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CMAS HDR-Plasmid (h) und CMAS HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CMAS-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CMAS-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.