CMAS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409575

概要

CMASは、シチジン一リン酸N-アセチルノイラミン酸シンテターゼをコードしており、核内に局在する酵素としてNeu5AcをCMP-Neu5Acへ変換する反応を触媒します。CMP-Neu5Acは、ゴルジ体で行われるシアリル化反応に必要な活性化ドナー基質です。CMP-シアル酸の利用可能量を制御することで、CMASは糖タンパク質および糖脂質のシアリル化に影響し、細胞間相互作用、受容体シグナル伝達、免疫認識、ならびに細胞膜上でのタンパク質安定性に関与します。CMASの活性は、中心的な炭水化物代謝をシアル酸経路内の糖鎖複合体（グリココンジュゲート）生合成、およびより広範な糖鎖付加ネットワークと結び付けます。CMAS機能の破綻によって生じるシアリル化パターンの変化は、先天性糖鎖合成異常症、神経発達表現型、ならびにがん細胞表面のリモデリングに関する研究において重要です。

CMAS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCMAS遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CMAS内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CMASのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CMASタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CMASシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CMAS欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CMASの機能に不可欠なCMASエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CMASゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CMAS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCMAS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CMAS遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CMAS HDRプラスミド（h）および CMAS HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCMASホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCMAS標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。