CHP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406233

Visão geral

CHP1 codifica a proteína homóloga da calcineurina B (CHP), um regulador miristoilado com motivo EF-hand de ligação a Ca2+ que se associa a múltiplos transportadores de membrana e proteínas de sinalização. A CHP é mais conhecida por modular a atividade do trocador Na+/H+, conectando assim a dinâmica intracelular de Ca2+ à homeostase do pH, ao transporte iônico e ao controle do volume celular e da organização do citoesqueleto. Por meio dessas funções, pode influenciar vias que regulam a polaridade epitelial, a proliferação e as respostas ao estresse. A desregulação da sinalização de Ca2+ e da regulação de trocadores envolvendo o CHP1 tem sido investigada em contextos como o comportamento de células tumorais e outros distúrbios nos quais alterações no balanço iônico e na regulação do pH contribuem para a fisiopatologia.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CHP (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CHP1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CHP1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CHP1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CHP.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CHP1 para a investigação da sinalização de CHP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CHP1 críticos para a função CHP
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CHP1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CHP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CHP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CHP1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CHP Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CHP (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CHP1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CHP1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.