CGRP2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401165-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CGRP2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CGRP2 Double Nickase Plasmid (h) e il CGRP2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CALCB. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CGRP2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401165-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CGRP2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401165-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CALCB codifica il peptide correlato al gene della calcitonina 2 (CGRP2), un neuropeptide generato tramite processamento proteolitico che segnala principalmente attraverso il recettore simil-calcitonina (CALCRL) in complesso con le proteine modulatrici dell’attività recettoriale (RAMP). CGRP2 attiva una segnalazione accoppiata a Gs che aumenta i livelli di cAMP e attiva programmi trascrizionali a valle dipendenti da PKA/CREB, influenzando il tono vasomotorio, l’infiammazione neurogena, la trasmissione nocicettiva e la comunicazione neuro-immunitaria. Nelle vie sensoriali periferiche e centrali, i peptidi della famiglia CGRP coordinano le risposte vascolari e immunitarie all’attività neuronale e modulano l’eccitabilità sinaptica. Una segnalazione CGRP deregolata è stata implicata nella biologia dell’emicrania, negli stati di dolore infiammatorio e nell’omeostasi vascolare, rendendo CALCB un bersaglio rilevante per studi meccanicistici in modelli neurovascolari e neuroinfiammatori.
CGRP2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CALCB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CALCB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CALCB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CALCB interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.