CEP55 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417522-ACT

A CEP55 humana (proteína centrosomal 55) é um regulador da citocinese que se localiza no corpo médio e coordena a abscisão durante a mitose tardia ao acionar a maquinaria de fissão de membrana dependente de ESCRT. Por meio de suas funções na atividade do centrossomo, na organização do fuso e na progressão do ciclo celular, a CEP55 ajuda a manter a fidelidade proliferativa e a separação adequada das células-filhas. A expressão alterada de CEP55 tem sido associada à instabilidade cromossômica e a programas de proliferação desregulados observados em múltiplos contextos de câncer. Consequentemente, a CEP55 é frequentemente estudada em vias que conectam o controle mitótico, a manutenção do genoma e a aptidão de células tumorais.

CEP55 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CEP55 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CEP55 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CEP55 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CEP55, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CEP55. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CEP55 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CEP55 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CEP55 em células tumorais com expressão de CEP55 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.