Centrin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400867

Visão geral

CETN2 codifica a centrina-2, uma proteína conservada de ligação ao cálcio do tipo EF-hand que se localiza em centrossomos e corpos basais e contribui para a duplicação de centríolos, a integridade do centrossomo e a organização do fuso durante a divisão celular. A centrina-2 também participa da montagem e da função do cílio primário, ligando a atividade de CETN2 ao controle do ciclo celular e a processos dependentes de microtúbulos, como a ciliogênese. Por meio de papéis na homeostase do centrossomo e em redes de sinalização ciliar, alterações na dinâmica da centrina-2 podem influenciar a estabilidade genômica e programas de diferenciação celular que frequentemente estão perturbados no câncer e na biologia relacionada a ciliopatias. Assim, CETN2 é amplamente utilizado como uma ferramenta molecular para investigar vias associadas ao centrossomo, a fidelidade mitótica e as saídas de sinalização dependentes de cílios em células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Centrin-2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CETN2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CETN2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CETN2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Centrin-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CETN2 para a investigação da sinalização de Centrin-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CETN2 críticos para a função Centrin-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CETN2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Centrin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Centrin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CETN2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Centrin-2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Centrin-2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CETN2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CETN2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.