Particules Lentivirales d'Activation (h) CDYL: sc-406624-LAC

Le CDYL humain (chromodomain Y-like) est un corégulateur transcriptionnel associé à la chromatine qui relie la reconnaissance épigénétique à la répression transcriptionnelle via des interactions avec des modifications des histones et des facteurs de remodelage de la chromatine. CDYL contribue à la formation de l’hétérochromatine et à la régulation de programmes d’expression génique impliqués dans le développement neuronal, le contrôle du cycle cellulaire et la différenciation, en modulant les états d’acétylation et de méthylation des histones. Par son rôle dans la compaction de la chromatine et le silence transcriptionnel, CDYL influence des voies qui régissent la stabilité du génome et l’identité cellulaire. Une activité de CDYL dérégulée et des états de chromatine altérés ont été associés à des réseaux transcriptionnels aberrants pertinents pour la biologie du cancer et des phénotypes neurodéveloppementaux.

Les particules d'activation lentivirales CDYL (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CDYL dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CDYL (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CDYL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CDYL. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CDYL ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.