CD274/PD-L1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-425636-LAC

Cd274 codifica CD274/PD-L1, um ligante de checkpoint imunológico que se liga ao PD-1 em células T ativadas e modula a sinalização a jusante para atenuar a ativação dirigida pelo TCR, a produção de citocinas e a função efetora citotóxica. Em camundongos, a expressão de PD-L1 é regulada dinamicamente por sinais inflamatórios, como o IFN-γ, por meio das vias JAK/STAT, e interage com programas de apresentação de antígenos e de genes estimulados por interferon. CD274 contribui para a tolerância periférica e molda as interações entre células imunes e tumor, bem como entre células imunes e estroma, ao limitar a ativação imunológica excessiva. A desregulação de PD-L1 é frequentemente estudada em contextos de inflamação crônica, infecção, modelos de autoimunidade e imunologia tumoral, para compreender mecanismos de evasão imune e sinalização de resistência adaptativa.

As Partículas de Ativação Lentivirais CD274/PD-L1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Cd274 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CD274/PD-L1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Cd274, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CD274/PD-L1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Cd274 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.