CCL14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406423

Übersicht

CCL14 kodiert ein sezerniertes CC-Chemokin, das die Leukozytenmigration koordiniert, indem es Chemokinrezeptoren auf Monozyten, Lymphozyten und weiteren Subpopulationen von Immunzellen bindet und aktiviert. Dadurch formt es Entzündungsgradienten und beeinflusst die Positionierung von Immunzellen im Gewebe. Als Teil des übergeordneten Chemokin-Netzwerks trägt CCL14 zur Chemotaxis, zur Modulation der Zytokin-Signalübertragung sowie zur Wechselwirkung mit Signalwegen bei, die die Endothelaktivierung und den Umbau der extrazellulären Matrix steuern. Eine fehlregulierte Chemokin-Signalgebung unter Beteiligung von CCL14 wird mit veränderten Mustern der Immunzellinfiltration in chronisch-entzündlichen Zuständen und bei tumorassoziierter Entzündung in Verbindung gebracht, bei denen Verschiebungen in Chemokin-Signalen die Immunüberwachung und stromale Interaktionen beeinflussen können. Entsprechend wird CCL14 häufig in Kontexten wie Assays zur Immunzellmigration, Profilierungen entzündlicher Signalwege und der systemweiten Kartierung von Chemokin-Netzwerken untersucht.

Das CCL14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CCL14-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CCL14-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CCL14 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CCL14-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CCL14-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CCL14-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CCL14-Exone abzielen, die für die CCL14-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CCL14-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CCL14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CCL14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CCL14-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CCL14 HDR-Plasmid (h) und CCL14 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CCL14-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CCL14-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.