Particules Lentivirales d'Activation (m) CCDC69: sc-424629-LAC

Le gène murin **Ccdc69** code **CCDC69**, une protéine contenant un domaine en coiled-coil, impliquée dans l’organisation du cytosquelette et la progression mitotique, avec des liens rapportés avec des processus associés au centrosome et au fuseau qui contribuent au maintien de la stabilité du génome. Les protéines d’échafaudage à coiled-coil coordonnent fréquemment l’assemblage de complexes multiprotéiques régulant la dynamique des microtubules, la signalisation des points de contrôle et le remodelage dépendant du cycle cellulaire. Une régulation altérée de ces voies peut influencer la prolifération, l’aneuploïdie et les réponses au stress, ce qui fait de **Ccdc69** une cible d’intérêt pour étudier les mécanismes reliant la fidélité de la division à l’homéostasie cellulaire au sens large. Dans des systèmes modèles murins, la modulation de l’expression de **Ccdc69** permet d’explorer les effets au niveau des voies sur le contrôle du cycle cellulaire et des phénotypes pertinents pour des maladies, sans pour autant suggérer des retombées cliniques.

Les particules d'activation lentivirales CCDC69 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Ccdc69 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CCDC69 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Ccdc69, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CCDC69. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Ccdc69 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.