Particules Lentivirales d'Activation (h) CCDC109A: sc-413850-LAC

MCU (CCDC109A) code la sous-unité formant le pore de l’uniporteur mitochondrial du calcium, un déterminant clé de l’entrée de Ca²⁺ dans la mitochondrie à travers la membrane interne. En couplant les signaux cytosoliques de Ca²⁺ aux niveaux de Ca²⁺ dans la matrice, MCU régule la phosphorylation oxydative, l’activité des enzymes du cycle de l’acide tricarboxylique et la production d’espèces réactives de l’oxygène, modulant ainsi la bioénergétique cellulaire et les réponses au stress. Le flux de Ca²⁺ dépendant de MCU influence également la transition de perméabilité mitochondriale, l’apoptose et des programmes transcriptionnels régulés par le Ca²⁺ liés au métabolisme et à l’inflammation. Une activité de MCU dérégulée a été associée à des altérations de la fonction mitochondriale dans des contextes tels que la neurodégénérescence, les lésions d’ischémie-reperfusion, la cardiomyopathie et le remodelage métabolique lié au cancer, ce qui en fait une cible fréquente dans les études sur la signalisation mitochondriale.

Les particules d'activation lentivirales CCDC109A (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MCU dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CCDC109A (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MCU, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CCDC109A. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MCU ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.