CBX4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403903-ACT

CBX4（chromobox 4）はポリコーム群（Polycomb group）タンパク質であり、抑制的なヒストン修飾を読み取るエピジェネティック・リーダーとして機能し、安定した転写サイレンシングに寄与します。ポリコーム抑制複合体の活性に関連する構成要素として、CBX4は長期的な遺伝子抑制を介して、クロマチン凝縮、細胞周期制御、分化プログラム、ならびに細胞アイデンティティの維持の調節を助けます。CBX4はまたSUMO E3リガーゼ活性も有しており、転写因子の機能やDNA損傷に伴うクロマチン応答を調節し得ます。CBX4の発現や活性の異常は、がん生物学で観察される増殖の変化や異常なエピジェネティック状態、さらに転写制御異常を伴うその他の疾患とも関連付けられています。

CBX4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CBX4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CBX4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CBX4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCBX4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CBX4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCBX4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCBX4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCBX4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCBX4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。