caveolin-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419481

Panoramica

Il gene Cav3 del topo codifica la caveolina-3, una proteina “scaffold” delle caveole arricchita nel tessuto muscolare, che organizza i microdomini di membrana e coordina la segnalazione a livello del sarcolemma. La caveolina-3 modula processi quali la meccanotrasduzione, il traffico vescicolare e la localizzazione dei canali ionici, influenzando vie come la segnalazione PI3K–AKT e la regolazione dell’ossido nitrico nel muscolo striato. Alterazioni della funzione di CAV3 sono associate a una compromissione della stabilità di membrana e dell’omeostasi della segnalazione nel muscolo scheletrico e cardiaco, a sostegno della sua rilevanza in modelli di miopatia e cardiomiopatia. Cav3 è quindi ampiamente utilizzato per studiare il controllo caveolae-dipendente della fisiologia muscolare, la riparazione della membrana e la compartimentalizzazione dei segnali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO caveolin-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cav3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cav3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cav3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina caveolin-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cav3 per lo studio della segnalazione di caveolin-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cav3 critici per la funzione di caveolin-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cav3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal caveolin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal caveolin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cav3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal caveolin-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR caveolin-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cav3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cav3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.