Plasmide CRISPR/Cas9 KO CAT-1 (h): sc-403628

Présentation

SLC7A1 code CAT-1 (transporteur d’acides aminés cationiques 1), un transporteur de la membrane plasmique à haute affinité, responsable de l’absorption, indépendante du sodium, de la L-arginine, de la L-lysine et de la L-ornithine. En contrôlant la disponibilité intracellulaire en arginine, CAT-1 influence la synthèse d’oxyde nitrique, le métabolisme des polyamines, ainsi que des voies de signalisation liées à mTOR et à l’état rédox, qui couplent le transport des nutriments à la croissance cellulaire et aux réponses au stress. L’activité de CAT-1 contribue également à la fonction des cellules endothéliales et immunitaires via la régulation du flux d’arginine et des programmes métaboliques en aval. La dérégulation du transport des acides aminés cationiques a été associée à des altérations de la biologie vasculaire, à l’inflammation et au remodelage métabolique dans des contextes cellulaires pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CAT-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC7A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC7A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC7A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CAT-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC7A1 pour l'étude de la signalisation de CAT-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC7A1 essentiels à la fonction de CAT-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC7A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CAT-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CAT-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC7A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CAT-1 plasmide HDR (h) et le CAT-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC7A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC7A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.