Plásmido Doble Nickase (h) casein kinase IIβ: sc-401684-NIC

CSNK2B codifica la subunidad reguladora beta de la proteína quinasa CK2, un complejo quinasa de serina/treonina constitutivamente activo que modula la selección de sustratos, la estabilidad y el ensamblaje de las subunidades catalíticas. La señalización de CK2 influye en el control dependiente de fosforilación de la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN, la apoptosis y el procesamiento de ARN, interactuando con vías como NF-κB, Wnt/β-catenina y PI3K/AKT. Mediante una amplia fosforregulación de factores de transcripción y proteínas asociadas a la cromatina, CSNK2B contribuye a la adaptación al estrés celular y a la proteostasis. La actividad desregulada de CK2 y la expresión alterada de CSNK2B se han vinculado a programas de señalización oncogénica y a fenotipos del neurodesarrollo, lo que la convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de redes de fosforilación.

casein kinase IIβ El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CSNK2B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CSNK2B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CSNK2B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CSNK2B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.