casein kinase IIβ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401684-ACT

CSNK2B codifica la subunità regolatoria beta della casein chinasi II (CK2), un complesso chinasico Ser/Thr costitutivamente attivo che modula la selettività per i substrati, la stabilità dell’enzima e la localizzazione subcellulare delle subunità catalitiche. La segnalazione mediata da CK2 influenza processi fondamentali, tra cui la progressione del ciclo cellulare, la risposta al danno al DNA, l’apoptosi e il controllo trascrizionale, integrandosi ampiamente in vie quali Wnt/β-catenina, NF-κB e PI3K/AKT. Attraverso la fosforilazione di numerosi bersagli nucleari e citoplasmatici, CSNK2B contribuisce alla regolazione della cromatina, al processamento dell’RNA e alla proteostasi. Un’attività di CK2 deregolata e un’espressione alterata di CSNK2B sono state associate a proliferazione aberrante e a segnali di risposta allo stress nella biologia del cancro, nonché a fenotipi di neurosviluppo, a supporto della sua rilevanza in modelli meccanicistici di malattia.

casein kinase IIβ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CSNK2B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

casein kinase IIβ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CSNK2B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CSNK2B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di casein kinase IIβ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CSNK2B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da casein kinase IIβ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via casein kinase IIβ nelle cellule tumorali con espressione di CSNK2B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.