casein kinase Iγ1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404681-ACT

CSNK1G1 codifica a caseína quinase Iγ1, uma quinase de serina/treonina associada à membrana da família CK1, que modula a sinalização dependente de fosforilação e a renovação/degradação de proteínas. As isoformas de CK1 regulam diversos processos, incluindo o tráfego de receptores, a temporização circadiana e a sinalização responsiva ao estresse, e interagem com vias como Wnt/β-catenina, Hedgehog e as respostas a danos no DNA por meio da fosforilação de componentes-chave dessas vias. Ao moldar a dinâmica da fosfo-sinalização nas membranas e em complexos citosólicos, CSNK1G1 influencia o controle do ciclo celular, a polaridade e circuitos de retroalimentação homeostática. A atividade desregulada de CK1 tem sido associada a alterações na sinalização proliferativa e a outros fenótipos relevantes para doenças, tornando o CSNK1G1 útil para estudos mecanísticos de reprogramação de vias impulsionada por quinases.

casein kinase Iγ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CSNK1G1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

casein kinase Iγ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CSNK1G1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CSNK1G1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de casein kinase Iγ1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CSNK1G1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de casein kinase Iγ1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via casein kinase Iγ1 em células tumorais com expressão de CSNK1G1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.