CapG Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419438-ACT

O gene Capg do camundongo codifica a CapG, uma proteína de capping da extremidade farpada dos filamentos de actina, regulada por cálcio e fosfoinositídeos, pertencente à família gelsolina/vilina, que modula a renovação da actina sem cortar os filamentos. A CapG dá suporte a processos de remodelação do citoesqueleto, incluindo ondulações de membrana (membrane ruffling), fagocitose e migração celular, conectando a arquitetura dinâmica de F-actina a sinais que controlam motilidade e adesão. Por meio dessas funções, a CapG é relevante para vias que governam o tráfego de células imunes e o comportamento de macrófagos, e alterações de expressão têm sido estudadas em contextos de invasão aberrante e fenótipos do tipo metastático. Seu papel na remodelação dependente de actina também a torna um alvo útil para investigar o controle citoesquelético da forma celular, endocitose e mecanotransdução.

CapG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Capg sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CapG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Capg em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Capg, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CapG. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Capg nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CapG no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CapG em células tumorais com expressão de Capg silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.