Plasmide CRISPR d'Activation (h) CAMP: sc-400651-ACT

Le gène humain **CAMP** code le peptide antimicrobien cathelicidine (LL‑37), un effecteur de l’immunité innée produit par les cellules épithéliales et les lignées myéloïdes, qui exerce une activité antimicrobienne directe et contribue à l’organisation des défenses de la barrière muqueuse. Au-delà de ses fonctions microbicides, **CAMP** module la signalisation inflammatoire en influençant la chimiotaxie, la production de cytokines et les réponses des neutrophiles et des monocytes, en lien avec les voies des récepteurs de reconnaissance de motifs et les programmes de réparation tissulaire. Une expression dérégulée de **CAMP** a été associée à des affections inflammatoires de la peau et des voies respiratoires, à des interactions hôte–microbiome altérées et à une susceptibilité accrue aux infections, ce qui en fait un point d’entrée pertinent pour étudier l’homéostasie immunitaire et le dialogue entre épithélium et système immunitaire.

CAMP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CAMP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CAMP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CAMP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CAMP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CAMP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CAMP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CAMP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CAMP dans les cellules tumorales présentant une expression de CAMP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.