Plásmido CRISPR de Activación (m) Calponin 1: sc-419719-ACT

El gen Cnn1 de ratón codifica la calponina 1, una proteína de unión a la actina enriquecida en el músculo liso diferenciado, donde modula el comportamiento contráctil al regular las interacciones actina–miosina y la organización del citoesqueleto. La calponina 1 participa en el control dependiente de calcio de la dinámica actomiosina y se asocia con la señalización RhoA/ROCK, la remodelación de adhesiones focales y el cambio fenotípico entre estados contráctil y sintético del músculo liso. Los cambios en la expresión de CNN1 se utilizan como lecturas de diferenciación del músculo liso y de remodelado vascular, con relevancia para procesos como la hiperplasia neointimal, programas de miofibroblastos asociados a fibrosis y alteraciones en la biomecánica tisular. Como regulador del citoesqueleto, la calponina 1 aporta un nodo funcional para estudiar la mecanotransducción, la migración y la señalización impulsada por la matriz extracelular en modelos de músculo liso vascular y de las vías respiratorias.

Calponin 1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cnn1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Calponin 1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cnn1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cnn1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Calponin 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cnn1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Calponin 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Calponin 1 en células tumorales con expresión de Cnn1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.