Partículas Lentivirales de Activación (m2) C3: sc-419391-LAC-2

El C3 de ratón codifica el componente 3 del complemento, un nodo central de la cascada del complemento que se procesa proteolíticamente en C3a y C3b para impulsar la opsonización, el reclutamiento de células inmunitarias y la amplificación de las respuestas inmunitarias innatas a través de las vías clásica, de las lectinas y alternativa. La activación de C3 favorece la eliminación de patógenos y complejos inmunes, regula la comunicación cruzada con la coagulación y la señalización inflamatoria, y modula la homeostasis tisular al influir en la fagocitosis y la producción de citocinas. La actividad desregulada de C3 se asocia con inflamación mediada por el complemento y patología por complejos inmunes, con relevancia para modelos de autoinmunidad, infección y procesos neuroinflamatorios. La edición genética de C3 en sistemas murinos permite realizar estudios mecanísticos sobre la activación del complemento, las interacciones receptor-ligando y los resultados funcionales in vivo y en ensayos con células inmunitarias primarias.

Las partículas de activación lentiviral C3 (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de C3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral C3 (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción C3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de C3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo C3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.