C18orf34 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415693-ACT

CCDC178は、ヒトタンパク質C18orf34をコードしている。C18orf34はコイルドコイル構造を含む因子で、機能アノテーションは限られているものの、タンパク質間相互作用ネットワークや細胞内の構造的配置に関与すると予測されている。コイルドコイルタンパク質は一般に、細胞骨格ダイナミクス、中心体関連過程、小胞輸送、複数タンパク質複合体の組み立てに寄与するため、C18orf34は細胞構築やシグナル協調の研究において重要な対象となる。近年のトランスクリプトームおよびプロテオームのデータセットからは、増殖の変化やストレス応答プログラムの改変など、疾患関連の細胞状態においてC18orf34の発現変動が示唆されているが、直接的な作用機序の関連はまだ明確になっていない。これらの特徴により、CCDC178はヒト細胞モデルにおける文脈依存的な遺伝子制御と、その下流の経路再編を解析するための有用な標的となる。

C18orf34 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CCDC178の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C18orf34 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CCDC178 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCCDC178転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C18orf34の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCCDC178遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC18orf34依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCCDC178発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC18orf34経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。