Plasmide CRISPR d'Activation (h) C12orf57: sc-408545-ACT

C12orf57 code une petite protéine humaine encore mal caractérisée, associée à l’homéostasie cellulaire fondamentale, et pour laquelle des données émergentes suggèrent des rôles dans le développement neuronal et les processus de réponse au stress. Bien que ses partenaires moléculaires et son positionnement dans les voies de signalisation fassent toujours l’objet d’études, des altérations du dosage de C12orf57 ont été liées à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des tableaux cliniques syndromiques, ce qui étaye la nécessité d’une régulation correcte du gène dans les tissus différenciés. Le contrôle transcriptionnel de C12orf57 pourrait s’inscrire dans des programmes plus larges régissant les décisions de destinée cellulaire, la protéostasie et la dynamique de la signalisation intracellulaire. Ces caractéristiques font de C12orf57 un locus utile pour étudier comment de subtils changements d’expression influencent des phénotypes cellulaires pertinents pour la biologie neurologique et du développement.

C12orf57 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C12orf57 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C12orf57 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C12orf57 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C12orf57, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C12orf57. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C12orf57 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C12orf57 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C12orf57 dans les cellules tumorales présentant une expression de C12orf57 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.