Plásmido CRISPR de Activación (h) BTF3a/b: sc-403520-ACT

BTF3 codifica el factor de transcripción basal 3, que produce las isoformas BTF3a y BTF3b, las cuales participan en el inicio de la transcripción dependiente de la ARN polimerasa II y en una regulación más amplia de la expresión génica. BTF3 también funciona como un factor asociado a polipéptidos nacientes, acoplando los programas transcripcionales a procesos cotraduccionales que influyen en la proteostasis y en las respuestas celulares al estrés. A través de estas funciones, BTF3 afecta vías fundamentales que controlan la proliferación, la apoptosis y la adaptación al estrés proteotóxico. Se ha informado de una expresión alterada de BTF3 en múltiples cánceres y otros trastornos caracterizados por una transcripción y una homeostasis proteica desreguladas, lo que respalda su utilidad como nodo mecanístico para la exploración de vías.

BTF3a/b El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BTF3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BTF3a/b El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BTF3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BTF3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BTF3a/b. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BTF3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BTF3a/b en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BTF3a/b en células tumorales con expresión de BTF3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.