BTF3a/b CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403520-ACT

BTF3 kodiert den basalen Transkriptionsfaktor 3, der die Isoformen BTF3a und BTF3b hervorbringt, welche an der RNA‑Polymerase‑II‑abhängigen Initiation der Transkription und an der übergeordneten Regulation der Genexpression beteiligt sind. BTF3 fungiert zudem als nascent‑polypeptide‑associated factor und verknüpft Transkriptionsprogramme mit kotranslationalen Prozessen, die die Proteostase und zelluläre Stressantworten beeinflussen. Über diese Funktionen wirkt BTF3 auf grundlegende Signalwege ein, die Proliferation, Apoptose und die Anpassung an proteotoxischen Stress steuern. Eine veränderte BTF3‑Expression wurde bei mehreren Krebsarten und anderen Erkrankungen beschrieben, die durch eine dysregulierte Transkription und Proteinhomöostase gekennzeichnet sind, was seine Eignung als mechanistischer Knotenpunkt für die Untersuchung von Signalwegen unterstreicht.

BTF3a/b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BTF3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BTF3a/b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BTF3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BTF3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BTF3a/b-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BTF3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BTF3a/b-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BTF3a/b-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BTF3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.