Plásmido Doble Nickase (h) brachyury: sc-416539-NIC

El gen humano **T** codifica el factor de transcripción de la familia T-box **brachyury**, un regulador maestro de la especificación del mesodermo y de la formación del eje corporal posterior durante el desarrollo temprano. Brachyury se une a motivos de ADN T-box para controlar programas génicos que coordinan la transición epitelio-mesenquimatosa, la migración celular y el compromiso de linaje, integrándose con las redes de señalización WNT/β-catenina, FGF y TGF-β. En contextos adultos y patológicos, la actividad alterada de brachyury se asocia con estados de diferenciación aberrantes y programas transcripcionales ligados a la invasividad, lo que lo convierte en un marcador ampliamente utilizado y en un nodo mecanístico en la investigación de la biología del desarrollo y la plasticidad de células tumorales. El análisis de la regulación transcripcional dependiente de T respalda estudios sobre decisiones de destino celular, dinámica de estados de la cromatina y el diálogo cruzado entre vías de señalización en sistemas modelo y líneas celulares diseñadas.

brachyury El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus T en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de T. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de T. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con T alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.