BR-cadherin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401987-ACT

CDH12 codifica a BR-caderina, uma caderina clássica enriquecida no sistema nervoso que medeia a adesão célula–célula homofílica dependente de Ca2+ e sustenta a arquitetura tecidual. Por meio da ligação às cateninas e da conexão com o citoesqueleto de actina, a BR-caderina participa da organização das junções aderentes, da polaridade celular e de programas coordenados de migração que moldam o desenvolvimento neural. Alterações na expressão de caderinas podem perturbar a dinâmica de adesão epitelial/neuronal e influenciar o “cross-talk” de sinalização com vias como Wnt/β-catenina e a remodelação do citoesqueleto regulada por GTPases da família Rho. A desregulação de CDH12 foi relatada em estudos sobre fenótipos do neurodesenvolvimento e biologia tumoral, motivando a investigação de como mudanças no estado de adesão impactam invasão, conectividade e diferenciação.

BR-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDH12 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BR-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDH12 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDH12, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BR-cadherin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDH12 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BR-cadherin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BR-cadherin em células tumorais com expressão de CDH12 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.