BMCP1 (UCP5) CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405051

Übersicht

SLC25A14 kodiert BMCP1 (UCP5), einen Carrier der inneren Mitochondrienmembran aus der Familie der Entkopplungsproteine, der die Protonenleitfähigkeit und das mitochondriale Membranpotenzial moduliert und dadurch die Effizienz der oxidativen Phosphorylierung sowie die zelluläre Energiebilanz beeinflusst. Die UCP5-Aktivität wirkt sich auf die Bildung mitochondrialer reaktiver Sauerstoffspezies, die Calciumhomöostase und die Anfälligkeit für stressinduzierte mitochondriale Dysfunktion aus und verknüpft das Protein damit mit der Redox-Homöostase und der neuronalen Bioenergetik. Die Expression ist insbesondere im Nervensystem angereichert, und eine veränderte Regulation von UCP5 wurde im Zusammenhang mit Mechanismen untersucht, die für Neurodegeneration, metabolischen Stress und mitochondriale Erkrankungen relevant sind, bei denen Kopplungseffizienz und oxidativer Stress gestört sind.

Das BMCP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC25A14-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC25A14-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC25A14 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BMCP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC25A14-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BMCP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC25A14-Exone abzielen, die für die BMCP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC25A14-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BMCP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom BMCP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC25A14-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BMCP1 HDR-Plasmid (h) und BMCP1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC25A14-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC25A14-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.