Plasmide CRISPR d'Activation (h) BMCP1 (UCP5): sc-405051-ACT

SLC25A14 code BMCP1 (également appelé UCP5), un transporteur de la membrane interne mitochondriale qui contribue à une fuite de protons régulée et à la modulation de l’efficacité de la phosphorylation oxydative. En influençant le potentiel de membrane mitochondrial, la production d’espèces réactives de l’oxygène (ROS) et le couplage du transport d’électrons à la synthèse d’ATP, BMCP1 s’inscrit à l’interface de voies qui contrôlent l’homéostasie bioénergétique, les réponses au stress et la dynamique mitochondriale. UCP5 est enrichi dans le système nerveux et a été associé à la résilience cellulaire face au stress oxydatif et métabolique, ce qui le rend pertinent pour les études sur la neurodégénérescence et la dysfonction mitochondriale. Une expression ou une activité altérées des protéines découplantes est également utilisée comme paramètre de lecture dans la recherche sur le métabolisme, la sensibilité à l’apoptose et le contrôle qualité des mitochondries.

BMCP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC25A14 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BMCP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC25A14 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC25A14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BMCP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC25A14 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BMCP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BMCP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC25A14 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.