BCAR3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404301-ACT

BCAR3 (Breast Cancer Anti-Estrogen Resistance 3) kodiert ein Adapterprotein, das Rezeptor- und Integrin-Signale mit dem Umbau des Zytoskeletts und der Zellmotilität koppelt. BCAR3 interagiert mit CAS/BCAR1 und verwandten Komponenten fokaler Adhäsionen, um die Aktivität von Src-Familien-Kinasen, die Signalgebung kleiner GTPasen sowie nachgeschaltete Signalwege zu modulieren, die Zelladhäsion, Migration und Proliferation beeinflussen. Über diese Netzwerkverknüpfungen trägt BCAR3 zur Regulation epithelial-mesenchymaler Dynamiken und kontextabhängiger Wachstumssignale bei. Eine veränderte BCAR3-Expression oder -Signalgebung wurde mit Tumorzellinvasion und endokrinen Response-Phänotypen in Zusammenhang gebracht und macht BCAR3 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung adhäsionsgetriebener onkogener Programme.

BCAR3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BCAR3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BCAR3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BCAR3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BCAR3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BCAR3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BCAR3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BCAR3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BCAR3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BCAR3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.