Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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BAF53 Double Nickase Plasmid (h): sc-403200-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BAF53 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BAF53 Double-Nickase-Plasmid (h) und BAF53 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACTL6A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: BAF53: sc-137062
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BAF53 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403200-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BAF53 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403200-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACTL6A kodiert BAF53A, eine aktinverwandte Untereinheit des ATP‑abhängigen SWI/SNF‑(BAF‑)Chromatin‑Remodeling‑Komplexes, der die Positionierung von Nukleosomen und die Zugänglichkeit des Chromatins moduliert. Durch die Regulation von Enhancer‑ und Promotorlandschaften trägt BAF53A zur transkriptionellen Kontrolle des Zellzyklusfortschritts, der Linienfestlegung und der Aufrechterhaltung proliferativer Zustände bei und greift dabei in Signalwege wie MYC‑ und E2F‑assoziierte Transkriptionsprogramme ein. Eine veränderte ACTL6A/BAF53A‑Aktivität wurde in mehreren Krebskontexten mit einer dysregulierten epigenetischen Kontrolle sowie mit aberranter entwicklungsbezogener Genexpression in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung chromatingetriebener Phänotypen macht. Die funktionelle Untersuchung von ACTL6A unterstützt mechanistische Forschung zu Abhängigkeiten des Chromatin‑Remodelings, transkriptioneller Plastizität und der genomweiten regulatorischen Architektur in humanen Zellen.
BAF53 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACTL6A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACTL6A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACTL6A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACTL6A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.