Plasmide CRISPR d'Activation (m) BACH1: sc-419283-ACT

Bach1 code le facteur de transcription BTB and CNC homology 1 (BACH1), un régulateur sensible à l’hème qui module les programmes de stress oxydatif en s’associant à de petites protéines Maf et en se liant aux éléments de reconnaissance Maf dans les promoteurs cibles. Dans les cellules murines, BACH1 constitue un nœud clé de l’homéostasie rédox, influençant l’expression de gènes cytoprotecteurs tels que Hmox1 et coordonnant les réponses aux espèces réactives de l’oxygène, au métabolisme du fer/de l’hème et à la signalisation inflammatoire. Par ces mécanismes, BACH1 recoupe des voies contrôlant la fonction mitochondriale, les décisions de destinée cellulaire et le remodelage transcriptionnel induit par le stress. Une activité dérégulée de BACH1 a été associée à des réponses modifiées aux dommages oxydatifs et a été étudiée dans des contextes liés à l’inflammation, à la neurodégénérescence et à la biologie tumorale, en tant que régulateur de l’adaptation cellulaire au stress.

BACH1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Bach1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BACH1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Bach1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Bach1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BACH1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Bach1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BACH1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BACH1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Bach1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.