Axl Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400393-LAC

L’AXL umano codifica Axl, una tirosin-chinasi recettoriale della famiglia TAM che viene attivata principalmente da GAS6 e segnala attraverso le vie PI3K–AKT, MAPK/ERK, NF-κB e STAT per regolare la sopravvivenza, la proliferazione e la migrazione cellulare, nonché la transizione epitelio-mesenchimale. Axl modula inoltre la segnalazione dell’immunità innata promuovendo l’efferocitosi e plasmando il tono infiammatorio, collegando le interazioni tumore–sistema immunitario con l’omeostasi tissutale. Un’espressione o un’attività di AXL deregolata è frequentemente associata a fenotipi invasivi, competenza metastatica e stati di tolleranza ai farmaci in molteplici modelli di cancro, ed è stata implicata nel rimodellamento fibrotico e in contesti di infiammazione cronica. Di conseguenza, AXL è ampiamente studiato come nodo che connette il crosstalk tra tirosin-chinasi recettoriali, le dinamiche di adesione e i programmi di segnalazione guidati dalle citochine.

Le particelle di attivazione lentivirale Axl (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di AXL in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Axl (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione AXL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Axl. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo AXL e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.