ATF4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-400155-KO-2

Descripción general

El factor activador de la transcripción 4 (ATF4) es un factor de transcripción bZIP central en la respuesta integrada al estrés, en la que se traduce de forma preferente tras la fosforilación de eIF2α y coordina programas transcripcionales adaptativos. ATF4 regula el metabolismo de los aminoácidos, la homeostasis redox, la autofagia y la señalización del estrés del retículo endoplásmico (RE), incluida la comunicación cruzada con PERK–EIF2AK3, ATF3 y CHOP/DDIT3 para equilibrar los resultados de supervivencia y apoptosis. A través del control de la detección de nutrientes y la proteostasis, ATF4 influye en la función mitocondrial y en programas de diferenciación celular, y contribuye a la reprogramación transcripcional durante la hipoxia y el estrés oxidativo. La actividad desregulada de ATF4 se ha implicado en la adaptación al estrés de células cancerosas, el estrés proteotóxico asociado a neurodegeneración y fenotipos de enfermedades metabólicas, lo que lo convierte en un nodo clave para estudios mecanísticos de redes génicas sensibles al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ATF4 (h2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ATF4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ATF4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ATF4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ATF4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ATF4 para la investigación de la señalización de ATF4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ATF4 críticos para la función de ATF4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ATF4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ATF4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ATF4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ATF4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ATF4 (h) y el plásmido HDR ATF4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ATF4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ATF4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.