Plasmide CRISPR d'Activation (h) Arp3β: sc-402186-ACT

ACTR3B code Arp3β, une protéine apparentée à l’actine dont on pense qu’elle contribue au remodelage dynamique du cytosquelette d’actine, en soutenant des processus tels que le contrôle de la forme cellulaire, le plissement de la membrane (membrane ruffling), l’endocytose et la migration cellulaire. En tant qu’élément de réseaux régulateurs de l’actine liés à la nucléation dépendante d’Arp2/3 et à l’assemblage d’actine branchée, Arp3β peut influencer l’organisation de l’actine corticale et les réponses du cytosquelette aux signaux. La perturbation des voies de polymérisation de l’actine est largement pertinente pour comprendre les mécanismes à l’origine du comportement invasif, des altérations d’adhérence et du dérèglement du trafic intracellulaire observés dans de nombreux contextes pathologiques. L’expression d’ACTR3B et sa modulation fonctionnelle constituent donc des points d’entrée utiles pour étudier des phénotypes centrés sur le cytosquelette et la connectivité des voies dans des modèles cellulaires humains.

Arp3β Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ACTR3B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Arp3β Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ACTR3B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ACTR3B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Arp3β. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ACTR3B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Arp3β au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Arp3β dans les cellules tumorales présentant une expression de ACTR3B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.