Arg Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-417779-LAC

ABL2 codifica Arg (ABL2), una tirosin-chinasi non recettoriale che integra segnali provenienti dai recettori dei fattori di crescita e dall’adesione mediata da integrine per regolare il rimodellamento del citoscheletro di actina, la formazione di ruffle di membrana e la migrazione cellulare. Arg opera in vie che collegano la segnalazione basata sulla fosforilazione alla dinamica del citoscheletro, inclusi il turnover delle adesioni focali e processi associati alle GTPasi della famiglia Rho, e può modulare l’endocitosi e le risposte cellulari a stimoli meccanici. Un’attività deregolata delle chinasi della famiglia ABL è stata associata a comportamenti invasivi alterati, segnalazione di sopravvivenza aberrante e riorganizzazione di reti oncogeniche in molteplici contesti tumorali. Di conseguenza, ABL2/Arg è ampiamente studiato in modelli di motilità cellulare, segnalazione dipendente dall’adesione e crosstalk tra vie guidate da chinasi rilevante per la biologia del cancro e per processi di neurosviluppo.

Le particelle di attivazione lentivirale Arg (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ABL2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Arg (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ABL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Arg. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ABL2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.