Plásmido Doble Nickase (h2) ARFGAP1: sc-403939-NIC-2
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h2)ARFGAP1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ARFGAP1 (h2) y el plásmido de doble nickasa ARFGAP1 (h22) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ARFGAP1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ARFGAP1 Anticuerpo (C-4): sc-271303
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h2) ARFGAP1 | sc-403939-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano ARFGAP1 codifica la proteína activadora de la GTPasa del factor de ADP-ribosilación 1 (ARFGAP1), un regulador asociado al aparato de Golgi que acelera la hidrólisis de GTP en pequeñas GTPasas de la familia ARF para coordinar la gemación de vesículas y la dinámica de las cubiertas. Al modular el tráfico retrógrado dependiente de COPI y el transporte entre endosomas y el Golgi, ARFGAP1 contribuye a la curvatura de la membrana, la clasificación de la carga y el mantenimiento de la arquitectura del Golgi, conectando la señalización de ARF con vías más amplias de secreción y reciclaje. La desregulación del tráfico mediado por ARFGAP1 se ha investigado en contextos en los que la proteostasis y el transporte de orgánulos se ven alterados, incluidos mecanismos relacionados con la neurodegeneración que implican el transporte vesicular y el manejo de proteínas. La edición genética de ARFGAP1 permite estudios mecanísticos del control de la vía de ARF, la biogénesis de vesículas y la función del Golgi mediante modelos de knockout/knock-in, el mapeo de interacciones y ensayos de tráfico en sistemas de células humanas.
ARFGAP1 El plásmido de doble nicasa (h2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ARFGAP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ARFGAP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ARFGAP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ARFGAP1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.