Plásmido CRISPR de Activación (h) Arc: sc-400231-ACT

ARC codifica la proteína asociada al citoesqueleto regulada por la actividad (Arc), producto de un gen de respuesta inmediata que acopla la actividad neuronal con la remodelación sináptica. Arc regula la endocitosis de los receptores AMPA, la dinámica del citoesqueleto de actina y la traducción local en las espinas dendríticas, moldeando así la plasticidad sináptica, el aprendizaje y la memoria. A través de estas funciones, se cruza con vías de señalización dependientes de la actividad y con programas homeostáticos de escalado sináptico que ajustan la neurotransmisión excitatoria. La expresión desregulada de ARC o el tráfico dependiente de Arc se han implicado en contextos de investigación neuropsiquiátrica y neurodegenerativa, incluidos estudios sobre disfunción cognitiva, susceptibilidad a convulsiones y cambios en la densidad sináptica.

Arc El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ARC sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Arc El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ARC en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ARC, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Arc. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ARC y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Arc en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Arc en células tumorales con expresión de ARC silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.