Plasmide CRISPR d'Activation (h) Aquaporin 9/AQP9: sc-401298-ACT

AQP9 code l’aquaporine 9, un canal aquaglycéroporine de la membrane plasmique qui facilite le transport bidirectionnel de l’eau et de petits solutés tels que le glycérol, l’urée et d’autres métabolites neutres. En régulant le flux de glycérol et l’équilibre osmotique, AQP9 influence le métabolisme énergétique cellulaire, l’homéostasie redox et les réponses aux signaux inflammatoires, avec des rôles particulièrement bien décrits dans les hépatocytes et les cellules de la lignée myéloïde. Une expression altérée d’AQP9 a été associée à une dérégulation métabolique et à des modifications de la fonction des cellules immunitaires, reliant ce canal à des voies impliquées dans la néoglucogenèse, le métabolisme des lipides et l’activation des leucocytes. Ces propriétés font d’AQP9 une cible utile pour étudier le couplage entre transport membranaire et métabolisme, ainsi que l’adaptation au stress, dans des modèles cellulaires humains.

Aquaporin 9/AQP9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AQP9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Aquaporin 9/AQP9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AQP9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AQP9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Aquaporin 9/AQP9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AQP9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Aquaporin 9/AQP9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Aquaporin 9/AQP9 dans les cellules tumorales présentant une expression de AQP9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.