Aquaporin 9/AQP9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401298-ACT

AQP9 kodiert Aquaporin 9, einen Aquaglyceroporin-Kanal der Plasmamembran, der den bidirektionalen Transport von Wasser und kleinen gelösten Stoffen wie Glycerol, Harnstoff und anderen neutralen Metaboliten erleichtert. Durch die Regulation des Glycerolflusses und des osmotischen Gleichgewichts beeinflusst AQP9 den zellulären Energiestoffwechsel, die Redoxhomöostase und Reaktionen auf entzündliche Signale; besonders ausgeprägte Funktionen wurden in Hepatozyten und Zellen der myeloischen Linie beschrieben. Eine veränderte AQP9-Expression wurde mit Stoffwechselentgleisungen und Veränderungen der Immunzellfunktion in Verbindung gebracht, wodurch dieser Kanal mit Signalwegen verknüpft ist, die an Glukoneogenese, Lipidverwertung und Leukozytenaktivierung beteiligt sind. Diese Eigenschaften machen AQP9 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung der Kopplung von Membrantransport und Stoffwechsel sowie der Stressadaptation in humanen Zellmodellen.

Aquaporin 9/AQP9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AQP9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Aquaporin 9/AQP9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AQP9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AQP9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Aquaporin 9/AQP9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AQP9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Aquaporin 9/AQP9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Aquaporin 9/AQP9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AQP9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.