Aquaporin 4/AQP4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400258-ACT

AQP4 kodiert Aquaporin‑4, den dominierenden Wasserkanal in Astrozyten-Endfüßchen und anderen polarisierten Membranen, wo er einen schnellen, bidirektionalen Wasserfluss über die Plasmamembran vermittelt. Durch die Kopplung osmotisch bedingter Wasserbewegungen mit der K+-Pufferung und der perivaskulären Flüssigkeitsdynamik trägt AQP4 zur Wasserhomöostase des Gehirns, zur glymphatischen Clearance und zur Regulation des Volumens des Extrazellulärraums bei. Seine Lokalisation in perivaskulären und subpialen Domänen über dystrophinassoziierte Komplexe verknüpft AQP4 mit der Membranscaffoldierung und mit astrozytär-neurovaskulären Interaktionen. Veränderungen der AQP4-Expression oder eine Fehl-Lokalisierung werden im Zusammenhang mit zerebralem Ödem, Störungen der Blut-Hirn-Schranke, Neuroinflammation und Mechanismen demyelinisierender Erkrankungen untersucht.

Aquaporin 4/AQP4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AQP4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Aquaporin 4/AQP4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AQP4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AQP4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Aquaporin 4/AQP4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AQP4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Aquaporin 4/AQP4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Aquaporin 4/AQP4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AQP4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.