Plásmido CRISPR de Activación (h) apoD: sc-402012-ACT

El gen humano **APOD** codifica la apolipoproteína D (apoD), una lipocalina secretada que se une y transporta pequeños ligandos hidrofóbicos, incluidos el ácido araquidónico y lípidos relacionados con el colesterol. La apoD contribuye a la homeostasis lipídica y a las respuestas al estrés celular, con funciones descritas en la modulación del daño oxidativo y de la señalización inflamatoria en contextos neuronales y vasculares. Su expresión se asocia con procesos como el metabolismo de lipoproteínas, la remodelación de membranas y el tráfico lipídico extracelular. En la literatura, la alteración de la regulación de APOD/apoD se ha vinculado con estados neurodegenerativos y neuroinflamatorios, disrregulación metabólica y patología relacionada con el sistema cardiovascular, lo que respalda su uso como marcador mecanístico en modelos relevantes de enfermedad.

apoD El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de APOD sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

apoD El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus APOD en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional APOD, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de apoD. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo APOD y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de apoD en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía apoD en células tumorales con expresión de APOD silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.