Plasmide Double Nickase (h) ANO1: sc-401314-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ANO1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ANO1 Double Nickase (h) et le plasmide ANO1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ANO1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ANO1 Antibody (C-5): sc-377115
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ANO1 | sc-401314-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ANO1 | sc-401314-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ANO1 (également connu sous le nom de TMEM16A) code un canal chlorure activé par le calcium qui régule la sécrétion de liquides épithéliaux, l’excitabilité membranaire et le tonus du muscle lisse en couplant les signaux intracellulaires de Ca²⁺ au flux d’anions. L’activité d’ANO1 module le transport transépithélial, contribue à la signalisation sensorielle et neuronale, et s’articule avec des voies dépendantes du calcium qui influencent la régulation du volume cellulaire et le potentiel de membrane. Une expression ou une fonction altérée d’ANO1 a été associée à des troubles de la sécrétion épithéliale et de la physiologie des voies aériennes, et le gène est fréquemment étudié en biologie tumorale, où le remodelage des canaux ioniques peut affecter la prolifération, la migration et le microenvironnement tumoral. Ces caractéristiques font d’ANO1 une cible utile pour disséquer la signalisation dépendante des canaux chlorure et les processus physiologiques induits par le calcium dans les cellules humaines.
ANO1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ANO1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ANO1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ANO1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ANO1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.