Particules Lentivirales d'Activation (h) ANKFY1: sc-406658-LAC

L’ANKFY1 humain (ankyrin repeat and FYVE domain containing 1) code un adaptateur associé aux membranes, impliqué dans le trafic endosomal et la dynamique membranaire dépendante des phosphoinositides. Grâce à son domaine FYVE, ANKFY1 est associé à des compartiments endosomaux enrichis en PI3P et est étudié pour ses rôles dans le tri des cargaisons, le recyclage des récepteurs et la régulation de la maturation des vésicules au sein du système endolysosomal. Ces processus interfèrent avec l’homéostasie des voies de signalisation et les réponses au stress cellulaire, ce qui fait d’ANKFY1 une cible pertinente pour des études mécanistiques sur la modulation de voies dépendante du trafic. La dérégulation des réseaux de transport endosomal est associée à une biologie complexe des maladies, notamment au remaniement oncogénique des voies de signalisation et à des phénotypes neurodégénératifs, ce qui soutient l’intérêt de la recherche pour des modèles de perturbation de la voie ANKFY1.

Les particules d'activation lentivirales ANKFY1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ANKFY1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ANKFY1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ANKFY1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ANKFY1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ANKFY1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.